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PANC-1/GEM人胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株

參  考  價: 2500

訂  貨  量: ≥1 瓶

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號:

品       牌:PriCells/原生原代

廠商性質(zhì):生產(chǎn)商

所  在  地:武漢市

更新時間:2021-10-22 14:08:10瀏覽次數(shù):291次

聯(lián)系我時,,請告知來自 化工儀器網(wǎng)
供貨周期 一周 規(guī)格 1 × 10^6 細(xì)胞數(shù)/1ml
應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) 主要用途 科研
PANC-1/GEM人胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株描述
該人胰腺癌細(xì)胞PANC-1來源于一名56歲白人男性。1 U/ml 左旋天冬酰胺酶(L-asparaginase)可抑制其生長,。此細(xì)胞可以在瓊脂糖上生長。

PANC-1/GEM人胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株

細(xì)胞描述

該人胰腺癌細(xì)胞PANC-1來源于一名56歲白人男性,。1 U/ml 左旋天冬酰胺酶(L-asparaginase)可抑制其生長,。此細(xì)胞可以在瓊脂糖上生長。


PANC-1/GEM人胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株

細(xì)胞特性

1) 來源:胰腺,,胰管,,上皮細(xì)胞癌   

2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長

3) 含量:>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用,。


細(xì)胞誘導(dǎo)構(gòu)建實驗步驟

1. MTT法檢測PANC-1對吉西他濱的IC50

將處于對數(shù)生長期的PANC-1細(xì)胞傳代后,,以6000/孔的密度接種在96孔板里,待細(xì)胞生長穩(wěn)定后,,將培養(yǎng)基更換為含不同濃度吉西他濱的*培養(yǎng)基,,濃度依次為0.03μg/mL、0.3μg/mL,、1.5μg/mL,、3μg/mL、6μg/mL,、12μg/mL,、18μg/mL。置于含5%CO2,、飽和濕度的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。取出96孔板,每孔加入20ul MTT(5 mg/mL)溶液加入到每個培養(yǎng)孔中,,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,。4 h后,取出96孔板,,吸除培養(yǎng)基,,排槍每孔加入150 µL Formazan溶液,置搖床上低速振蕩10-30min,,使結(jié)晶物充分溶解,。使用酶標(biāo)儀在OD 570nm處測量各孔的吸光值,分析實驗結(jié)果,,得出IC50為0.9μg/mL,,則選擇此濃度作為PANC-1耐藥株誘導(dǎo)的起始濃度。


2  PANC-1細(xì)胞耐藥分步誘導(dǎo)

取處于對數(shù)生長期的PANC-1細(xì)胞,,加入含0.9μg/mL吉西他濱的*培養(yǎng)基,,置于含5%CO2、飽和濕度的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。隔日換液(同濃度含藥培養(yǎng)基),,待細(xì)胞可以穩(wěn)定生長后加大藥物濃度,每次增加2倍,,直至10個月后,,細(xì)胞可以在含18μg/mL吉西他濱的*培養(yǎng)基保持穩(wěn)定生長4day,視為細(xì)胞耐藥成功,,并命名為PANC-1/GEM,。


運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,,請立即與我們聯(lián)系,。

(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。


細(xì)胞接收后的處理

1)收到細(xì)胞后,,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),,同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收,。

4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ,。              

       

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

 1)準(zhǔn)備DMEM (含NaHCO3 1.5g/L推薦128-0001或者GIBCO,貨號12800017,添加NaHCO3 1.5g/L)培養(yǎng)基,,優(yōu)質(zhì)胎牛血清15%,,GlutaMAX-1谷氨酰胺(推薦:0900)1%,P/S 1%(可在*培養(yǎng)基中加入最大耐藥濃度18ug/ml的GEM)

該細(xì)胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長良好,,大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO3(3.7g/L),,若使用DMEM(3.7g/L NaHCO3)培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞時需要提高CO2濃度(7%-10%)。

2)細(xì)胞在傳代和剛復(fù)蘇時較為脆弱,,中止液須為不含GEM的*培養(yǎng)基,,且在細(xì)胞未貼壁期間和貼壁前期需用不含GEM的*培養(yǎng)基,待細(xì)胞生長狀態(tài)穩(wěn)定時再根據(jù)需要濃度添加 GEM,。

3)若細(xì)胞生長狀態(tài)較為緩慢時,,可適當(dāng)降低GEM的濃度,或使用不含GEM的*培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長狀態(tài)較好時,,再更換為所需的GEM濃度,。

4)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

5)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,。


二.細(xì)胞處理:

1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,,*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。


對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用,。


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